Στις 9 Σεπτεμβρίου 2015, γιατροί από το Επιστημονικό Ερευνητικό Ινστιτούτο Σκύλων και Τραυματολογίας. Ο R. M. Gorbacheva ήταν ο πρώτος που χρησιμοποίησε τη μέθοδο της μεταμόσχευσης κοπράνων
Μέρος ενός υγιούς δότη
Τι πρόβλημα λύνει η μέθοδος μεταμόσχευσης μικροβίων κοπράνων;
- Η μέθοδος εμφανίστηκε το 1958, όταν ο ΑμερικανόςΟ χειρουργός Ben Eisman θεράπευσε τέσσερις ασθενείς με ψευδομεμβρανώδη κολίτιδα με μεταμόσχευση κοπράνων. Η μέθοδος έχει αναβιώσει λόγω νέων διαγνωστικών μεθόδων, όπως η αλληλουχία 16S. Μέχρι τα μέσα της δεκαετίας του 1990, πίστευαν ότι δεκάδες βακτήρια ζούσαν στα έντερα. Και με την έλευση αυτής της μεθόδου, αποδείχθηκε ότι υπάρχουν χιλιάδες είδη σε διαφορετικές αναλογίες. Και κάθε άτομο έχει μια ατομική σύνθεση της μικροχλωρίδας. Γνωρίζοντας αυτό, αποφασίσαμε να δοκιμάσουμε τη μέθοδο μεταμόσχευσης μικροχλωρίδας κοπράνων σε νόσο μοσχεύματος έναντι ξενιστή (GVHD).
Η αλληλουχία του γονιδίου 16S rRNA χρησιμοποιεί δεδομένα γιανουκλεοτιδικές αλληλουχίες απομονωμένων καθαρών καλλιεργειών. Το γονίδιο 16S rRNA επιλέχθηκε ως παγκόσμιος δείκτης για την αναγνώριση ειδών: υπάρχει στα γονιδιώματα όλων των προκαρυωτικών και έχει σχετικά χαμηλή μεταβλητότητα. Η μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας γονιδίου 16S rRNA είναι το «χρυσό πρότυπο» για την ακρίβεια της ταυτοποίησης βακτηριακών ειδών.
Η μεταμόσχευση μικροχλωρίδας κοπράνων στοχεύει ναβελτίωση των αποτελεσμάτων της θεραπείας για GVHD με εντερική συμμετοχή. Ερευνήσαμε αρχικά τι συμβαίνει στη μικροχλωρίδα σε ασθενείς με GI GVHD. Σε σύγκριση με την περίοδο πριν από την HSCT (μεταμόσχευση αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων), η ποιοτική και ποσοτική σύνθεση του μικροβίου αλλάζει σημαντικά. Ο αριθμός των ενεργών-μεταβολιζόντων, αναερόβιων βακτηρίων μειώνεται απότομα και ο αριθμός των βακτηρίων που προκαλούν φλεγμονή αυξάνεται, εμφανίζεται μια έντονη ανισορροπία του βιολογικού οικοσυστήματος. Υπήρχε μια πρόταση: μπορούμε να αλλάξουμε αυτή την ανισορροπία μεταμοσχεύοντας τη μικροχλωρίδα από έναν υγιή δότη;
Oleg Goloshchapov
— Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της GVHD του εντέρου και άλλων φλεγμονωδών παθήσεων του εντέρου που αντιμετωπίζονται με την ίδια μέθοδο;
- Στους λόγους εμφάνισης.Η φλεγμονώδης νόσος του εντέρου (IBD) είναι μια γενετικά καθορισμένη αλλαγή στο ανοσοποιητικό σύστημα. Αυτές είναι έμφυτες αλλαγές που εμφανίζονται με την πάροδο του χρόνου. Και το GVHD είναι συνέπεια της μεταμόσχευσης μυελού των οστών, κατά την οποία το ανοσοποιητικό σύστημα κάποιου άλλου μεταμοσχεύεται σε ένα άτομο. Μετά τη μεταμόσχευση, εμφανίζονται νέα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στο σώμα του ασθενούς που «παλεύουν» με ιστούς σε έναν άγνωστο οργανισμό - αυτή είναι η νόσος μοσχεύματος έναντι ξενιστή, GVHD.
Ταυτόχρονα η αντίδρασημόσχευμα έναντι όγκου: νέα ανοσοκύτταρα βρίσκουν και καταστρέφουν τα εναπομείναντα καρκινικά κύτταρα. Σε πολλές περιπτώσεις, αυτή είναι μια απαραίτητη διαδικασία για τον οργανισμό του ασθενούς, με την επιφύλαξη αξιόπιστου ελέγχου φαρμάκων. Ταυτόχρονα, η κλινική εικόνα της GVHD με εντερική συμμετοχή είναι πράγματι πολύ παρόμοια με την IBD. Και η ιστολογική εικόνα είναι παρόμοια, και η θεραπεία.
Ο Oleg Goloshchapov αποφοίτησε από την ιατρική σχολή στοΤο Armavir το 1989 και η Παιδιατρική Ιατρική Ακαδημία της Αγίας Πετρούπολης το 1995. Εκπαιδεύτηκε και εργάστηκε στη Γερμανία και την Αυστρία. Το 2021, υποστήριξε τη διδακτορική του διατριβή με θέμα «Ο ρόλος της καλπροτεκτίνης κοπράνων και της διόρθωσης μικροβίων στη διάγνωση και θεραπεία της οξείας νόσου μοσχεύματος έναντι ξενιστή του γαστρεντερικού σωλήνα μετά από αλλογενή μεταμόσχευση αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων αίματος».
Το 2017–2020, οι αιματολόγοι καιαναζωογονητές SRI DOGIT τους. Ο R. M. Gorbacheva και το Children's Scientific and Clinical Center for Infectious Diseases διεξήγαγαν μια μελέτη που αξιολόγησε την κλινική αποτελεσματικότητα της μεθόδου μεταμόσχευσης μικροβίων κοπράνων (FMT) σε σοβαρές εντερικές βλάβες σε ασθενείς μετά από μεταμόσχευση μυελού των οστών.
Το 2022, μια ομάδα γιατρών που εργάστηκαν για τη βελτίωση και την εφαρμογή της μεθόδου FMT στο κανονικό ιατρείο της κλινικής έλαβε το Βραβείο Vocation για την εφεύρεση μιας νέας μεθόδου θεραπείας.
Τελευταία ευκαιρία για σωτηρία
Πώς καταλήξατε στη νέα μέθοδο;
— Βασιστήκαμε στις αρχές του off-label.Εάν η κατάσταση του ασθενούς είναι σοβαρή, οι παραδοσιακές θεραπείες που χρησιμοποιούνται στη θεραπεία δεν βοηθούν, η δυναμική είναι αρνητική, τότε χρησιμοποιείται μια μέθοδος που βοηθά μια άλλη κατηγορία ασθενών σε παρόμοια κατάσταση. Για παράδειγμα, γνωρίζουμε ότι για τη μόλυνση με Clostridial (λοίμωξη που προκαλείται από το βακτήριο Clostridium difficile), η παραδοσιακή θεραπεία είναι η μεταμόσχευση μικροβίων κοπράνων. Γιατί να μην δοκιμάσετε εάν άλλες μέθοδοι - ανοσοκαταστολή, προβιοτικά, αντιβιοτική θεραπεία - δεν έχουν αποτέλεσμα; Ήμασταν οι πρώτοι στη Ρωσία που μεταμοσχεύσαμε ένα 10χρονο κορίτσι. Πριν από αυτό, το κορίτσι είχε υποβληθεί σε ανεπιτυχή θεραπεία για έξι μήνες και η πρόγνωση ήταν αμφίβολη.
— Πώς εκτελέστηκε τεχνικά αυτή η διαδικασία την πρώτη φορά;
Ήμασταν εξαιρετικά ανεπαρκείς τεχνικά. Το μόσχευμα εισήχθη με FGDS μέσω του καναλιού εργασίας του ενδοσκοπίου πίσω από το δωδεκαδάκτυλο και με κολονοσκόπηση στο τυφλό έντερο.
- Τι άλλαξε από τότε;
- Απολύτως τα πάντα - για παράδειγμα, μέθοδοι χορήγησηςμεταμόσχευση. Υπάρχουν παραδοσιακοί τρόποι τοκετού - μέσω του ανώτερου γαστρεντερικού σωλήνα (με χρήση γαστροσκόπιου) και μέσω του κατώτερου (κολονοσκόπιο, ανιούσα κλύσμα). Το κλινικό αποτέλεσμα είναι περίπου το ίδιο, αλλά με τις εργαλειακές μεθόδους χορήγησης, εμφανίζονται πιο συχνά επιπλοκές - διατρήσεις, έμετος, παλινδρόμηση, πνευμονία. Ως εκ τούτου, αποφασίσαμε να ακολουθήσουμε έναν διαφορετικό δρόμο, ώστε να μην υπάρχουν μέθοδοι αναισθησίας και ενόργανης επεμβατικής παράδοσης. Έτσι γεννήθηκε η ιδέα της από του στόματος χορήγησης κατεψυγμένων καψουλών που περιέχουν μικροχλωρίδα.
εμβόλιο
Στην αρχή προέκυψε το ερώτημα πού να παρασκευαστεί το μόσχευμα,Δεν το κάνουμε αυτό στην κλινική μας. Επικοινωνήσαμε με το εργαστήριο με το οποίο πραγματοποιήσαμε κοινές μελέτες καλπροτεκτίνης κοπράνων και συμφωνήσαμε να κάνουμε μεταμόσχευση από αυτά. Στην αρχή ήταν μια διαδρομή δοκιμής και λάθους, στη συνέχεια δοκιμάστηκαν και τελειοποιήθηκαν οι τεχνολογίες. Το μόσχευμα εισήχθη αρχικά σε σύριγγες και έπρεπε να εισαχθεί μέσω ενός σωλήνα ή FGDS εντός έξι ωρών μετά την κατασκευή. Και μόνο τότε γεννήθηκε η ιδέα με κάψουλες και κατάψυξη. Πραγματοποιήσαμε πολλά πειράματα και αναπτύξαμε ένα ολόκληρο σχέδιο για την προσθήκη κρυοπροστατευτικών σε βακτήρια ώστε να μην καταστρέφονται κατά την κρυοσυντήρηση. Έτσι πήραμε πολύ καλά αποτελέσματα με την απόψυξη και φτάσαμε στις κάψουλες.
Για να δημιουργήσετε μια μεταμόσχευση σε κάψουλες, χρησιμοποιήστεδότης cal. Οι δότες είναι εθελοντές που ελέγχονται για συμβατότητα με τον ασθενή με βάση τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος και τη σύνθεση της μικροχλωρίδας. Τα κόπρανα του δότη αναμειγνύονται με γλυκερίνη και αποστειρωμένο σιρόπι ζάχαρης και στη συνέχεια τοποθετούνται σε διπλές κάψουλες σκληρής ζελατίνης. Οι κάψουλες συσκευάζονται σε αποστειρωμένα δοχεία και τοποθετούνται σε καταψύκτη.
- Και τώρα χρησιμοποιείτε μόνο κάψουλες;
Ναι, τόσο για ενήλικες όσο και για παιδιά.Το μόνο που θα μπορούσε να είναι πρόβλημα είναι η ηλικία των παιδιών, κάτω των τεσσάρων ετών. Το μικρότερο παιδί που πήρε την κάψουλα ήταν τεσσάρων ετών. Έπρεπε να βεβαιωθούμε ότι δεν θα το μασήσει, δεν θα το εισπνεύσει, αλλά θα το καταπιεί.
Έπρεπε να ζητήσω από το εργαστήριο να το κάνεικάψουλες προπόνησης. Πάγωσαν φυσιολογικό ορό και εκπαιδεύτηκαν για μια εβδομάδα, ώστε ο μικρός ασθενής να καταπίνει τρεις με τέσσερις κάψουλες την εβδομάδα. Όλα πήγαν χωρίς επιπλοκές. Τι γίνεται όμως με τα μικρότερα παιδιά; Σε αυτή την περίπτωση, ο ανιόντας κλύσμα μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη και ασφαλής μέθοδος χορήγησης.
Τεχνικές μεταμόσχευσης
Ακριβές ερευνητικές και φιλανθρωπικές συνεισφορές
— Πώς σας υποστηρίζει η AdVita fund;
— Η AdVita βοήθησε σχεδόν σε όλα τα στάδια.Τι χρειάζεται για να πραγματοποιηθεί μια μεταμόσχευση μικροβίων; Ο ασθενής πρέπει να περάσει αμειβόμενες εξετάσεις και μετά να πάρει κάψουλες. Πληρώνονται επίσης, αλλά βασικά όλα τα χρήματα πηγαίνουν στην εξέταση του δότη - πρέπει να εξεταστεί πολύ διεξοδικά, και αυτό απαιτεί ένα τεράστιο χρηματικό ποσό. Επομένως, αφού πούμε στον ασθενή ότι πρέπει να γίνει μελέτη, ρωτάμε αν ο ασθενής είναι εγγεγραμμένος στο ταμείο. Αν ναι, τα πράγματα γίνονται πολύ πιο εύκολα. Μεταμοσχευτική μελέτη κοπράνων ασθενούς - επίσης AdVita. Και, πάλι, η αλληλουχία είναι μια πολύ δαπανηρή μελέτη. Η AdVita βοήθησε επίσης εδώ, χάρη σε μια τέτοια υποστήριξη, έχουμε προχωρήσει στην επιστήμη όσον αφορά τη μελέτη της σύνθεσης της μικροχλωρίδας κατά τη διάρκεια του FMT.
— Κρίνοντας από τον αριθμό των δημοσιεύσεων, υπάρχει η αίσθηση ότι εφαρμόζετε μαζικά αυτήν τη μέθοδο.
— Δεν πρόκειται για μαζική εφαρμογή, είναι πολλέςαντενδείξεις. Η διαδικασία δεν μπορεί να πραγματοποιηθεί μετά από HSCT, στην οποία τα λευκοκύτταρα (κοκκιοκύτταρα και λεμφοκύτταρα) δεν έχουν ακόμη αποκατασταθεί στο περιφερικό αίμα. Πρέπει να υπάρχει ανοσία, γιατί η εισαγωγή μεγάλου αριθμού μικροβίων μπορεί να προκαλέσει μολυσματικές επιπλοκές.
Εξαιρούνται ασθενείς με ανεπάρκεια πολλαπλών οργάνων.ανεπάρκεια - ηπατική, νεφρική, αναπνευστική. Αυτό δεν είναι ένα χάπι που γιατρεύει τα πάντα. Λοιπόν, η συμμόρφωση του ασθενούς (η συμμόρφωση του ασθενούς στη θεραπεία, ο βαθμός ετοιμότητας να ακολουθήσει τις συνταγές και τις συστάσεις του γιατρού) παίζει μεγάλο ρόλο. Εάν ο ασθενής αμφιβάλλει για την αποτελεσματικότητα, δεν πραγματοποιούμε τη διαδικασία.
— Όσον αφορά την κλίμακα προετοιμασίας και τη σειρά χορήγησης, είναι παρόμοια με τη μεταμόσχευση μυελού των οστών. Είναι συγκρίσιμο;
- Απόλυτα συγκρίσιμο.Υπάρχει ένα πακέτο εγγράφων, ενημερωμένη συγκατάθεση. Στην πρώτη επίσκεψη, ο ασθενής έρχεται και εξοικειώνεται με τη νέα μέθοδο θεραπείας, κατά προτίμηση με συγγενείς. Ο ασθενής ενημερώνεται για τις αρχές της μεθόδου θεραπείας, εξηγούνται λεπτομερώς οι παρενέργειες και οι ανεπιθύμητες ενέργειες που μπορεί να εμφανιστούν. Τι πρέπει να προσέξεις, τι είναι αποδεκτό, τι είναι απαράδεκτο. Ο ασθενής συμφωνεί με αυτό, μελετά στο σπίτι, κοιτάζει ανοιχτές πηγές και παίρνει μια απόφαση.
Κάψουλες μοσχεύματος
— Ποια είναι η τρέχουσα κατάσταση της εργασίας για τη μέθοδο στο ιατρείο σας; Η επιστημονική κοινότητα περιμένει κάτι από εσάς;
Δεν μου αρέσει η ρουτίνα.Φυσικά, παίρνουμε τους ασθενείς μας, τώρα έχουμε τρεις ή τέσσερις από αυτούς, που έλαβαν θεραπεία πριν από ένα μήνα. Αλλά αν εφαρμόσετε τη μέθοδο μόνο για θεραπευτικούς σκοπούς και δεν εξερευνήσετε περαιτέρω, τότε όλα θα είναι αρκετά βαρετά. Απαιτούνται νέα σημεία που δεν έχουν ακόμη διερευνηθεί, όπως η αποαποικιοποίηση ανθεκτικών στα αντιβιοτικά βακτηρίων, όταν οι ασθενείς έχουν και GVHD με εντερική βλάβη και Klebsiella pneumoniae (βακτήριο που προκαλεί οξεία βλάβη στα έντερα και την αναπνευστική οδό) στα έντερα.
Στέλνουμε αναφορές για τους ασθενείς μας σε μια ομάδα,που ασχολείται με τη μεταμόσχευση μικροβίων στην Ευρωπαϊκή Ένωση Μεταμόσχευσης Μυελού των Οστών (EBMT). Αυτή η ομάδα συλλέγει δεδομένα που περιλαμβάνουν όλες τις μεταμοσχεύσεις μικροβίων που πραγματοποιήθηκαν σε ασθενείς με GVHD σε όλες τις κλινικές. Και δημοσιεύει κριτικές συστημάτων - μεγάλα άρθρα που μιλούν για τη μέθοδο, τις παρενέργειες, την αποτελεσματικότητα και πολλά άλλα. Και δεν βρισκόμαστε στην τελευταία θέση εδώ, γιατί, σε αντίθεση με μεμονωμένες περιπτώσεις χρήσης σε άλλες χώρες, πετύχαμε μια απευθείας τυχαιοποιημένη κλινική δοκιμή.
— Ποιοι ειδικοί ανέπτυξαν αυτήν τη μέθοδο μαζί σας;
«Πολλοί ειδικοί εμπλέκονται σε αυτό ταυτόχρονα.Οι εργαζόμενοι στο εργαστήριο επιλέγουν και εξετάζουν έναν δότη, φτιάχνουν κάψουλες. Οι αιματολόγοι παρακολουθούν τους ασθενείς και τους πηγαίνουν σε ένα συμβούλιο όπου συζητούν πιθανή μεταμόσχευση μικροβίων. Οι βακτηριολόγοι καθορίζουν εάν ο ασθενής αποικίζεται από παθογόνο χλωρίδα. Οι μοριακοί βιολόγοι μελετούν τη σύνθεση της μικροχλωρίδας σε διάφορα στάδια της μεταμόσχευσης. Βιοπληροφορικοί, οι οποίοι στη συνέχεια βγάζουν συμπέρασμα με βάση τα αποτελέσματα. Αυτή είναι μια ολόκληρη ομάδα, χάρη στην οποία η μέθοδος από τη συνηθισμένη έχει γίνει πολλά υποσχόμενη.
Διαβάστε περισσότερα:
Οι ζωντανοί οργανισμοί έχουν κάνει τον Άρη ακατοίκητο
Η πιο ισχυρή σύγκρουση μαύρης τρύπας στο σύμπαν απέδειξε τη θεωρία του Αϊνστάιν
Τα οστά στο Midnight Terror Cave εξετάστηκαν προσεκτικά και βρέθηκαν ανεξήγητα ίχνη.