Il 9 settembre 2015, i medici dell'Istituto di ricerca scientifica su cani e traumatologia hanno preso il nome. R. M. Gorbacheva è stato il primo a utilizzare il metodo del trapianto fecale
Parte di un donatore sano
Quale problema risolve il metodo di trapianto di microbiota fecale?
- Il metodo è apparso nel 1958, quando l'americanoIl chirurgo Ben Eisman ha curato quattro pazienti con colite pseudomembranosa con un trapianto fecale. Il metodo è stato ripreso grazie a nuovi metodi diagnostici, come il sequenziamento 16S. Fino alla metà degli anni '90 si credeva che dozzine di batteri vivessero nell'intestino. E con l'avvento di questo metodo, si è scoperto che esistono migliaia di specie in proporzioni diverse. E ogni persona ha una composizione individuale del microbiota. Sapendo questo, abbiamo deciso di provare il metodo di trapianto del microbiota fecale nella malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD).
Il sequenziamento del gene 16S rRNA utilizza i dati susequenze nucleotidiche di colture pure isolate. Il gene 16S rRNA è stato scelto come marker universale per l'identificazione delle specie: è presente nei genomi di tutti i procarioti e ha una variabilità relativamente bassa. Il metodo di sequenziamento del gene 16S rRNA è il "gold standard" per l'accuratezza dell'identificazione delle specie batteriche.
Il trapianto di microbiota fecale mira amigliorare i risultati della terapia per GVHD con coinvolgimento intestinale. Per prima cosa abbiamo studiato cosa succede al microbiota nei pazienti con GVHD GI. Rispetto al periodo precedente al trapianto di cellule staminali ematopoietiche, la composizione qualitativa e quantitativa del microbiota cambia in modo significativo. Il numero di batteri anaerobici e metabolizzanti attivi diminuisce drasticamente e aumenta il numero di batteri che causano l'infiammazione, appare uno squilibrio pronunciato dell'ecosistema biologico. C'era un suggerimento: possiamo cambiare questo squilibrio trapiantando il microbiota da un donatore sano?
Oleg Gološchapov
— Qual è la differenza tra GVHD intestinale e altre malattie infiammatorie intestinali trattate con lo stesso metodo?
- Nelle ragioni dell'apparenza.La malattia infiammatoria intestinale (IBD) è un cambiamento geneticamente determinato nel sistema immunitario. Questi sono cambiamenti innati che si manifestano nel tempo. E la GVHD è una conseguenza del trapianto di midollo osseo, in cui il sistema immunitario di qualcun altro viene trapiantato in una persona. Dopo il trapianto, nel corpo del paziente compaiono nuove cellule immunitarie che "combattono" con i tessuti di un organismo sconosciuto: questa è la malattia del trapianto contro l'ospite, GVHD.
Allo stesso tempo, la reazionetrapianto contro tumore: nuove cellule immunitarie trovano e distruggono le cellule tumorali rimanenti. In molti casi, questo è un processo necessario per il corpo del paziente, soggetto a un controllo farmacologico affidabile. Allo stesso tempo, il quadro clinico della GVHD con coinvolgimento intestinale è in effetti molto simile a quello delle IBD. E il quadro istologico è simile e la terapia.
Oleg Goloshchapov si è laureato in medicina aArmavir nel 1989 e Accademia di medicina pediatrica di San Pietroburgo nel 1995. Formatosi e lavorato in Germania e Austria. Nel 2021 ha discusso la sua tesi di dottorato sul tema "Il ruolo della calprotectina fecale e la correzione del microbiota nella diagnosi e nel trattamento della malattia acuta del trapianto contro l'ospite del tratto gastrointestinale dopo trapianto allogenico di cellule staminali del sangue ematopoietico".
Nel 2017-2020, ematologi erianimatori SRI DOGIT li. R. M. Gorbacheva e il Children's Scientific and Clinical Center for Infectious Diseases hanno condotto uno studio che ha valutato l'efficacia clinica del metodo di trapianto di microbiota fecale (FMT) nelle lesioni intestinali gravi nei pazienti dopo il trapianto di midollo osseo.
Nel 2022, un gruppo di medici che ha lavorato per migliorare e implementare il metodo FMT nella pratica regolare della clinica ha ricevuto il Premio Vocazione per aver inventato un nuovo metodo di trattamento.
Ultima possibilità di salvezza
Come ti è venuta in mente il nuovo metodo?
— Ci siamo basati sui principi dell'off-label.Se le condizioni del paziente sono gravi, i rimedi tradizionali utilizzati in terapia non aiutano, le dinamiche sono negative, quindi viene utilizzato un metodo che aiuta un'altra categoria di pazienti in una situazione simile. Ad esempio, sappiamo che per l'infezione da Clostridial (un'infezione causata dal batterio Clostridium difficile), il trattamento tradizionale è il trapianto di microbiota fecale. Perché non provare se altri metodi - immunosoppressione, probiotici, terapia antibiotica - non funzionano? Siamo stati i primi in Russia a trapiantare una bambina di 10 anni. Prima di questo, la ragazza era stata curata senza successo per sei mesi e la prognosi era dubbia.
— Come è stata eseguita tecnicamente questa procedura la prima volta?
Eravamo estremamente sprovveduti dal punto di vista tecnico. L'innesto è stato introdotto da FGDS attraverso il canale di lavoro dell'endoscopio dietro il duodeno e mediante colonscopia al cieco.
- Cosa è cambiato da allora?
- Assolutamente tutto, ad esempio i metodi di amministrazionetrapianto. Esistono metodi tradizionali di consegna: attraverso il tratto gastrointestinale superiore (usando un gastroscopio) e attraverso quello inferiore (colonoscopio, clistere ascendente). L'effetto clinico è approssimativamente lo stesso, ma con i metodi di somministrazione strumentali si verificano più spesso complicazioni: perforazioni, vomito, rigurgito, polmonite. Pertanto, abbiamo deciso di intraprendere una strada diversa, in modo che non ci fossero anestesia e metodi di erogazione strumentali invasivi. Nasce così l'idea della somministrazione orale di capsule congelate che contengono il microbiota.
corruzione
All'inizio è sorta la domanda su dove preparare l'innesto,Non lo facciamo nella nostra clinica. Abbiamo contattato il laboratorio con cui abbiamo condotto studi congiunti sulla calprotectina fecale e abbiamo deciso di fare un trapianto da loro. All'inizio è stato un percorso per tentativi, poi le tecnologie sono state testate e perfezionate. L'innesto è stato prima portato in siringhe e doveva essere inserito attraverso un tubo o FGDS entro sei ore dalla fabbricazione. E solo allora è nata l'idea delle capsule e del congelamento. Abbiamo condotto molti esperimenti e sviluppato un intero schema per aggiungere crioprotettori ai batteri in modo che non venissero distrutti durante la crioconservazione. Quindi abbiamo ottenuto ottimi risultati con lo sbrinamento e siamo arrivati alle capsule.
Per creare un trapianto in capsule, utilizzaredonatore cal. I donatori sono volontari che vengono testati per la compatibilità con il paziente in base ai risultati degli esami del sangue e alla composizione del microbiota. Le feci del donatore vengono mescolate con glicerolo e sciroppo di zucchero sterile, quindi poste in capsule di gelatina dura doppia. Le capsule sono confezionate in contenitori sterili e poste in congelatore.
- E ora usi solo capsule?
Sì, sia per adulti che per bambini.L'unica cosa che potrebbe essere un problema è l'età dei bambini, sotto i quattro anni. Il bambino più piccolo che ha preso la capsula aveva quattro anni. Dovevamo assicurarci che non lo masticasse, non lo inalasse, ma lo inghiottisse.
Ho dovuto chiedere al laboratorio di farlocapsule di allenamento. Hanno congelato la soluzione salina e si sono allenati per una settimana in modo che il piccolo paziente potesse deglutire da tre a quattro capsule a settimana. Tutto è andato senza complicazioni. Ma che dire dei bambini più piccoli? In questo caso, il clistere ascendente può essere un metodo di somministrazione promettente e sicuro.
Tecniche di trapianto
Ricerca costosa e contributi di filantropi
— In che modo il fondo AdVita ti supporta?
— AdVita ha aiutato in quasi tutte le fasi.Cosa serve per eseguire un trapianto di microbiota? Il paziente deve superare i test a pagamento, quindi ottenere le capsule. Sono anche pagati, ma fondamentalmente tutto il denaro va all'esame del donatore: deve essere esaminato molto attentamente e questo richiede un'enorme quantità di denaro. Pertanto, dopo aver detto al paziente che è necessario fare uno studio, chiediamo se il paziente è iscritto al fondo. Se è così, le cose diventano molto più facili. Studio post-trapianto delle feci del paziente - anche AdVita. E, ancora, il sequenziamento è uno studio molto costoso. AdVita ha anche aiutato qui, grazie a tale supporto, siamo avanzati nella scienza in termini di studio della composizione del microbiota durante FMT.
— A giudicare dal numero di pubblicazioni, c'è la sensazione che stiate applicando questo metodo in modo massiccio.
— Questa non è un'applicazione di massa, ce ne sono moltecontroindicazioni. La procedura non può essere eseguita dopo il trapianto, in cui i leucociti (granulociti e linfociti) non sono ancora stati ripristinati nel sangue periferico. L'immunità deve esserci, perché l'introduzione di un gran numero di microbi può causare complicazioni infettive.
Sono esclusi i pazienti con insufficienza multiorgano.insufficienza - epatica, renale, respiratoria. Questa non è una pillola che cura tutto. Ebbene, la compliance del paziente (l'adesione del paziente al trattamento, il grado di disponibilità a seguire le prescrizioni e le raccomandazioni del medico) gioca un ruolo importante. Se il paziente dubita dell'efficacia, non eseguiamo la procedura.
— In termini di scala di preparazione e ordine di somministrazione, è simile al trapianto di midollo osseo. È paragonabile?
- Assolutamente paragonabile.C'è un pacchetto di documenti, il consenso informato. Alla prima visita, il paziente viene e conosce il nuovo metodo di terapia, preferibilmente con i parenti. Al paziente vengono illustrati i principi del metodo di terapia, vengono spiegati in dettaglio gli effetti collaterali e indesiderati che possono verificarsi. A cosa devi prestare attenzione, cosa è accettabile, cosa è inaccettabile. Il paziente è d'accordo, studia a casa, guarda a fonti aperte e prende una decisione.
Capsule da innesto
— Qual è lo stato attuale del lavoro sul metodo nella tua pratica? La comunità scientifica si aspetta qualcosa da te?
Non mi piace la routine.Certo, prendiamo i nostri pazienti, ora ne abbiamo tre o quattro, che hanno ricevuto la terapia un mese fa. Ma se applichi il metodo solo a scopi terapeutici e non esplori ulteriormente, tutto sarà piuttosto noioso. Sono necessari nuovi punti che non sono stati ancora esplorati, come la decolonizzazione dei batteri resistenti agli antibiotici, quando i pazienti hanno sia GVHD con danno intestinale che Klebsiella pneumoniae (un batterio che provoca danni acuti all'intestino e alle vie respiratorie) nell'intestino.
Inviamo rapporti sui nostri pazienti a un gruppo,che si occupa di trapianto di microbiota presso la European Association for Bone Marrow Transplantation (EBMT). Questo gruppo raccoglie dati che includono tutti i trapianti di microbiota eseguiti su pazienti con GVHD in tutte le cliniche. E pubblica recensioni di sistema: articoli di grandi dimensioni che parlano del metodo, degli effetti collaterali, dell'efficacia e altro ancora. E non siamo all'ultimo posto qui, perché, a differenza di casi isolati di utilizzo in altri paesi, siamo riusciti in uno studio clinico randomizzato direttamente.
— Quali specialisti hanno sviluppato questo metodo insieme a te?
— В нем участвуют сразу много специалистов.Gli operatori di laboratorio selezionano ed esaminano un donatore, producono capsule. I medici di ematologia monitorano i pazienti e li portano in un consiglio dove discutono del potenziale trapianto di microbiota. I batteriologi determinano se il paziente è colonizzato dalla flora patogena. I biologi molecolari studiano la composizione del microbiota nelle varie fasi del trapianto. Bioinformatici, che poi traggono una conclusione sulla base dei risultati. Questa è un'intera squadra, grazie alla quale il metodo dall'ordinario è diventato promettente.
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