2015 m. rugsėjo 9 d. pavadinto Šunų ir traumatologijos mokslinio tyrimo instituto gydytojai. R. M. Gorbačiova pirmoji panaudojo išmatų persodinimo metodą
Dalis sveiko donoro
Kokią problemą išsprendžia išmatų mikrobiotos persodinimo metodas?
– Metodas atsirado 1958 m., kai amerikietisChirurgas Benas Eismanas keturis pacientus, sergančius pseudomembraniniu kolitu, išgydė išmatų persodinimu. Metodas buvo atgaivintas dėl naujų diagnostikos metodų, tokių kaip 16S sekos nustatymas. Iki dešimtojo dešimtmečio vidurio buvo manoma, kad žarnyne gyvena dešimtys bakterijų. Ir atsiradus šiam metodui, paaiškėjo, kad rūšių yra tūkstančiai skirtingomis proporcijomis. Ir kiekvienas žmogus turi individualią mikrobiotos sudėtį. Tai žinodami nusprendėme išbandyti išmatų mikrobiotos transplantacijos metodą sergant transplantato prieš šeimininką liga (GVHD).
16S rRNR genų sekos nustatymui naudojami duomenys apieišskirtų grynųjų kultūrų nukleotidų sekos. 16S rRNR genas buvo pasirinktas kaip universalus rūšies identifikavimo žymeklis: jis yra visų prokariotų genomuose ir pasižymi santykinai mažu kintamumu. 16S rRNR genų sekos nustatymo metodas yra „auksinis standartas“ bakterijų rūšių identifikavimui.
Išmatų mikrobiotos transplantacijos tikslaspagerinti GVHD gydymo su žarnynu rezultatus. Pirmiausia ištyrėme, kas atsitinka su GI GVHD pacientų mikrobiota. Palyginti su laikotarpiu iki HSCT (hematopoetinių kamieninių ląstelių transplantacijos), kokybinė ir kiekybinė mikrobiotos sudėtis labai pasikeičia. Smarkiai mažėja aktyviai metabolizuojančių, anaerobinių bakterijų, daugėja uždegimą sukeliančių bakterijų, atsiranda ryškus biologinės ekosistemos disbalansas. Buvo pasiūlymas: ar galime pakeisti šį disbalansą persodindami sveiko donoro mikrobiotą?
Olegas Gološčapovas
— Kuo skiriasi žarnyno GVHD nuo kitų uždegiminių žarnyno ligų, kurios gydomos tuo pačiu metodu?
– Išvaizdos priežastyse.Uždegiminė žarnyno liga (IBD) – tai genetiškai nulemtas imuninės sistemos pokytis. Tai yra įgimti pokyčiai, kurie atsiranda laikui bėgant. O GVHD yra kaulų čiulpų transplantacijos pasekmė, kai žmogui persodinama kažkieno imuninė sistema. Po transplantacijos paciento organizme atsiranda naujų imuninių ląstelių, kurios „kovoja“ su audiniais nepažįstamame organizme – tai transplantato prieš šeimininką liga, GVHD.
Tuo pačiu ir reakcijatransplantatas prieš naviką: naujos imuninės ląstelės randa ir sunaikina likusias vėžio ląsteles. Daugeliu atvejų tai yra būtinas procesas paciento organizmui, kuriam taikoma patikima vaistų kontrolė. Tuo pačiu metu klinikinis GVHD vaizdas su žarnyno pažeidimu iš tikrųjų yra labai panašus į IBD. Ir histologinis vaizdas panašus, ir terapija.
Olegas Gološčapovas baigė medicinos mokykląArmaviras 1989 m. ir Sankt Peterburgo vaikų medicinos akademija 1995 m. Stažavosi ir dirbo Vokietijoje ir Austrijoje. 2021 metais apgynė daktaro disertaciją tema „Išmatų kalprotektino ir mikrobiotos korekcijos vaidmuo diagnozuojant ir gydant ūminę virškinimo trakto transplantato prieš šeimininką ligą po alogeninės kraujodaros kamieninių ląstelių transplantacijos“.
2017–2020 metais gydytojai hematologai irreanimatologai SRI DOGIT juos. R. M. Gorbačiova ir Vaikų infekcinių ligų mokslinis ir klinikinis centras atliko tyrimą, kurio metu buvo įvertintas išmatų mikrobiotos transplantacijos (FMT) metodo klinikinis veiksmingumas esant sunkiems žarnyno pažeidimams pacientams po kaulų čiulpų transplantacijos.
2022 metais grupė gydytojų, kurie dirbo tobulinant ir įdiegiant FMT metodą į nuolatinę klinikos praktiką, gavo pašaukimo apdovanojimą už naujo gydymo metodo išradimą.
Paskutinė galimybė išsigelbėti
Kaip sugalvojote naują metodą?
— Rėmėmės off-label principais.Jei paciento būklė sunki, tradicinės terapijos priemonės nepadeda, dinamika neigiama, tuomet taikomas metodas, padedantis kitai pacientų kategorijai panašioje situacijoje. Pavyzdžiui, žinome, kad Clostridial infekcija (infekcija, kurią sukelia Clostridium difficile bakterija) tradicinis gydymas yra išmatų mikrobiotos transplantacija. Kodėl nepabandžius, jei kiti metodai – imunosupresija, probiotikai, antibiotikų terapija – nepadeda? Pirmieji Rusijoje persodinome 10 metų mergaitę. Prieš tai mergina šešis mėnesius buvo nesėkmingai gydoma, o prognozė buvo abejotina.
— Kaip ši procedūra buvo techniškai atlikta pirmą kartą?
Techniškai buvome labai neišprusę. Transplantas buvo įvestas FGDS per darbinį endoskopo kanalą už dvylikapirštės žarnos ir kolonoskopijos būdu į akląją žarną.
– Kas pasikeitė nuo to laiko?
– Absoliučiai viskas – pavyzdžiui, administravimo būdaitransplantacija. Yra tradiciniai pristatymo būdai – per viršutinį virškinimo traktą (naudojant gastroskopą) ir per apatinį (kolonoskopas, kylančioji klizma). Klinikinis poveikis yra maždaug toks pat, tačiau naudojant instrumentinius vartojimo būdus, komplikacijos atsiranda dažniau - perforacijos, vėmimas, regurgitacija, pneumonija. Todėl nusprendėme pasukti kitu keliu, kad nebūtų anestezijos ir instrumentinių invazinių gimdymo būdų. Taip gimė idėja per burną pristatyti šaldytas kapsules, kuriose yra mikrobiota.
transplantantas
Iš pradžių kilo klausimas, kur paruošti skiepą,Savo klinikoje to nedarome. Susisiekėme su laboratorija, su kuria atlikome bendrus išmatų kalprotektino tyrimus ir sutarėme iš jų atlikti transplantaciją. Iš pradžių tai buvo bandymų ir klaidų kelias, vėliau technologijos buvo išbandytos ir tobulinamos. Iš pradžių transplantatas buvo atneštas švirkštais ir turėjo būti įkištas per vamzdelį arba FGDS per šešias valandas po pagaminimo. Ir tik tada gimė idėja su kapsulėmis ir šaldymu. Atlikome daugybę eksperimentų ir sukūrėme visą schemą, kaip į bakterijas įpilti krioprotektorių, kad jos nebūtų sunaikintos šaldant. Taigi atitirpinant pasiekėme labai gerų rezultatų ir priėjome prie kapsulių.
Norėdami sukurti transplantaciją kapsulėse, naudokitedonoro kal. Donorai yra savanoriai, kuriems atliekamas suderinamumas su pacientu, remiantis kraujo tyrimų rezultatais ir mikrobiotos sudėtimi. Donorų išmatos sumaišomos su gliceroliu ir steriliu cukraus sirupu, tada dedamos į dvigubas kietas želatinos kapsules. Kapsulės supakuotos į sterilius indelius ir dedamos į šaldiklį.
– O dabar vartojate tik kapsules?
Taip, tiek suaugusiems, tiek vaikams.Vienintelis dalykas, kuris gali būti problema, yra vaikų amžius, iki ketverių metų. Jauniausias vaikas, išgėręs kapsulę, buvo ketverių metų. Turėjome žiūrėti, kad jis nekramtytų, ne įkvėptų, o nurytų.
Teko paprašyti laboratorijos tai padarytitreniruočių kapsulės. Jie užšaldė fiziologinį tirpalą ir savaitę treniravosi, kad mažasis pacientas nurytų tris keturias kapsules per savaitę. Viskas praėjo be komplikacijų. Bet kaip su jaunesniais vaikais? Šiuo atveju perspektyvus ir saugus vartojimo būdas gali būti kylanti klizma.
Transplantacijos technika
Brangūs tyrimai ir filantropų indėlis
— Kaip jus remia „AdVita“ fondas?
— AdVita padėjo beveik visuose etapuose.Ko reikia norint atlikti mikrobiotos transplantaciją? Pacientas turi išlaikyti mokamus tyrimus, tada gauti kapsules. Jie taip pat mokami, bet iš esmės visi pinigai atitenka donoro apžiūrai – jį reikia labai nuodugniai ištirti, o tam reikia milžiniškų pinigų. Todėl pasakę pacientui, kad reikia atlikti tyrimą, pasiteiraujame, ar pacientas registruotas kasoje. Jei taip, viskas bus daug lengviau. Paciento išmatų tyrimas po transplantacijos – taip pat AdVita. Ir vėlgi, sekos nustatymas yra labai brangus tyrimas. Čia taip pat padėjo „AdVita“, nes tokios paramos dėka mes padarėme pažangą moksle tirdami mikrobiotos sudėtį FMT metu.
— Sprendžiant iš publikacijų skaičiaus, kyla jausmas, kad masiškai taikote šį metodą.
— Tai nėra masinė programa, jų yra daugkontraindikacijos. Procedūra negali būti atliekama po HSCT, kai periferiniame kraujyje leukocitai (granulocitai ir limfocitai) dar nėra atstatyti. Turi būti imunitetas, nes patekę daug mikrobų gali sukelti infekcinių komplikacijų.
Pacientai, sergantys daugelio organų nepakankamumu, neįtraukiami.nepakankamumas - kepenų, inkstų, kvėpavimo takų. Tai nėra tabletė, kuri išgydo viską. Na, o paciento laikymasis (paciento gydymo laikymasis, pasirengimo laikytis gydytojo nurodymų ir rekomendacijų laipsnis) vaidina didelį vaidmenį. Jei pacientas abejoja veiksmingumu, procedūros neatliekame.
— Pagal paruošimo mastą ir vartojimo tvarką ji panaši į kaulų čiulpų transplantaciją. Ar tai palyginama?
– Visiškai palyginama.Yra dokumentų paketas, informuotas sutikimas. Pirmojo vizito metu pacientas ateina ir susipažįsta su naujuoju terapijos metodu, geriausia su artimaisiais. Pacientui supažindinami su terapijos metodo principais, išsamiai paaiškinami galimi šalutiniai ir nepageidaujami poveikiai. Į ką reikia atkreipti dėmesį, kas priimtina, kas nepriimtina. Pacientas su tuo sutinka, mokosi namuose, žiūri į atvirus šaltinius ir priima sprendimą.
Transplantato kapsulės
— Kokia šiuo metu darbo su metodu padėtis jūsų praktikoje? Ar mokslo bendruomenė iš jūsų ko nors tikisi?
Nemėgstu rutinos.Žinoma, imame savo pacientus, dabar turime tris ar keturis, kurie prieš mėnesį buvo gydomi. Bet jei metodą taikysite tik terapiniais tikslais ir nenagrinėsite toliau, tada viskas bus gana nuobodu. Reikalingi nauji, dar neištirti punktai, pavyzdžiui, antibiotikams atsparių bakterijų dekolonizacija, kai pacientai žarnyne turi ir GVHD su žarnyno pažeidimu, ir Klebsiella pneumoniae (bakterija, sukelianti ūmų žarnyno ir kvėpavimo takų pažeidimą).
Mes siunčiame ataskaitas apie savo pacientus grupei,kuri nagrinėja mikrobiotos transplantaciją Europos kaulų čiulpų transplantacijos asociacijoje (EBMT). Ši grupė renka duomenis, apimančius visas mikrobiotos transplantacijas, atliktas GVHD pacientams visose klinikose. Ir jis skelbia sistemų apžvalgas – didelius straipsnius, kuriuose kalbama apie metodą, šalutinį poveikį, efektyvumą ir kt. Ir mes čia ne paskutinėje vietoje, nes, skirtingai nei pavieniai vartojimo atvejai kitose šalyse, mums pavyko atlikti tiesioginį atsitiktinių imčių klinikinį tyrimą.
— Kokie specialistai sukūrė šį metodą kartu su jumis?
„Daug specialistų tuo užsiima vienu metu.Laboratorijos darbuotojai parenka ir ištiria donorą, gamina kapsules. Hematologai stebi pacientus ir veda juos į konsiliumą, kuriame aptaria galimą mikrobiotos transplantaciją. Bakteriologai nustato, ar pacientą kolonizuoja patogeninė flora. Molekuliniai biologai tiria mikrobiotos sudėtį įvairiuose transplantacijos etapuose. Bioinformatikai, kurie, remdamiesi rezultatais, padaro išvadą. Tai visa komanda, kurios dėka įprastas metodas tapo perspektyvus.
Skaityti daugiau:
Gyvi organizmai padarė Marsą negyvenamu
Galingiausias juodosios skylės susidūrimas visatoje įrodė Einšteino teoriją
Vidurnakčio teroro urve esantys kaulai buvo kruopščiai ištirti ir rasti nepaaiškinamų pėdsakų.